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龙眼成花逆转花芽α-tublin基因的克隆与原核表达
游向荣1,2,3, 黄榕辉4, 王喜军4, 黄春梅4, 梁文裕4, 陈伟5,2
1. 福建农林大学作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室;2.生命科学学院;3.2. 广西农业科学院农产品加工研究所;4.福建农林大学生命科学学院;5.福建农林大学作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室
摘要:  运用蛋白质组学方法比较龙眼(Dimocarpus longan Lour.)正常成花和成花逆转花芽的差异蛋白质组,并应用RACE方法克隆其中上调表达的α-微管蛋白基因α-tubulin,获得一段长度为1641 bp的cDNA,其中包括1个1350 bp的开放阅读框[GenBank登录号: FJ479617(GI:218202929)]。将α-tubulin全长cDNA在大肠杆菌中表达,获得1个约49.6 kD的外源蛋白,经Western blotting验证为α-微管蛋白。RT-PCR和Western blotting分别检测了α-tubulin在转录和翻译水平上的表达, 结果表明,α-微管蛋白在成花逆转的龙眼花芽中上调表达,可能是逆转花芽形态差异表现的原因之一。
关键词:  龙眼  花芽  α-tublin基因  克隆  原核表达
DOI:10.3969/j.issn.1005-3395.2011.01.009
分类号:
基金项目:国家自然科学基金项目(30571293);福建省自然科学基金项目(2007J0045);教育部博士点基金项目(200803890009)
Cloning and Prokaryotic Expression of α-tublin Gene in Longan Floral Reversion Buds
YOU Xiang-rong,HUANG Rong-hui,WANG Xi-jun,HUANG Chun-mei,LIANG Wen-yu,CHEN Wei
1. Key Laboratory of Ministry of Education for Genetics, Breeding and Multiple Utilization of Crops;2.College of Life Sciences, Fujian Agriculture and Forestry University;3.2. Institute of Agro-food Science and Technology, Guangxi Academy of Agricultural Sciences;4.Key Laboratory of Ministry of Education for Genetics, Breeding and Multiple Utilization of Crops
Abstract:  The differential proteins of floral reversion buds at different stages in longan (Dimocarpus longan Lour.) were compared using proteomics method. The results showed that α-tubulin could up-regulate in floral reversion buds of longan, and its gene α-tubulin was cloned using RACE method. A full length of 1641 bp cDNA, with a 1350 bp open reading frame, was obtained (GenBank accession number: FJ479617). When α-tubulin gene was transformed into E. coli and expressed, a 49.6 kD heterologous protein verified as α-tubulin by Western blotting was obtained. Different expression of α-tubulin at transcription and translation levels using RT-PCR and Western blotting, respectively, showed that α-tubulin up-regulated in longan floral reversion buds. It was one of reasons that floral reversion buds were different from normal flowering buds.
Key words:  Longan  Flower bud  α-tublin gene  Clone  Prokaryotic expression

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